Località: Rozzano, IT, 20089 Job title: PNRR - Post Doc Nell’ambito del _Piano Nazionale di Ripresa e Resilienza (PNRR)_, l’IRCCS Istituto Clinico Humanitas ha avvitato le procedure di selezione pubblica per il reclutamento nell’ambito dei progetti di Valorizzazione e potenziamento della ricerca biomedica del SSN. RIFERIMENTO COMMESSA E CUP: Numero progetto:PNRR-MCNT2-2023-12378017 CUP: E27G24000030006 TITOLO E BREVE DESCRIZIONE DEL PROGETTO: Utilizzo della tecnologia degli oligonucleotidi modulatori dello splicing per manipolare gli eventi di splicing alternativo aberrante nella terapia della sclerosi multipla (Exploiting the Splice-Switching Oligonucleotides technology to modulate aberrant alternative splicing events in multiple sclerosis therapy) Lo splicing alternativo (AS) è un meccanismo post-trascrizionale che porta alla produzione di mRNA diversi a partire da singoli geni. Una deregolazione del meccanismo di splicing alternativo è stata implicata in molte malattie, tra cui la sclerosi multipla (SM), una malattia autoimmune cronica del sistema nervoso centrale caratterizzata da linfociti T autoreattivi. Sebbene la deregolazione dello splicing alternativo sia stata dimostrata nella SM, non sono ancora state sviluppate strategie terapeutiche mirate a questo meccanismo alterato. Il ripristino dell'equilibrio tra le isoforme deregolate dello splicing potrebbe rappresentare una strategia terapeutica innovativa nelle cellule immunocompetenti. In questo contesto, il progetto si propone di: - esplorare il profilo dello splicing alternativo nei linfociti T sia di pazienti affetti da SM sia di controlli per evidenziare gli eventi di splicing alternativo deregolati; - modulare significativamente gli eventi di splicing alternativo fortemente deregolati nei linfociti T utilizzando oligonucleotidi antisenso per lo switch dello splicing; - valutare la potenziale patogenicità degli eventi di splicing alternativo identificati in termini di traduzione di potenziali neoepitopi. Profilo professionale e breve descrizione delle attività richieste: Ruolo: Post Doc Attività: - Profilazione dello splicing alternativo: - Isolamento di RNA: Isolamento di RNA di alta qualità da linfociti T di pazienti con SM e controlli sani. - Sequenziamento RNA-seq: Esecuzione di esperimenti di sequenziamento RNA-seq ad alta profondità per identificare gli eventi di splicing alternativo differenzialmente espressi nei due gruppi. - Validazione degli eventi di splicing: - PCR quantitativa (qPCR): Validazione degli eventi di splicing identificati tramite RNA-seq utilizzando qPCR. - Western blotting: Analisi dell'espressione delle isoforme proteiche derivanti dagli eventi di splicing alternativi. - Modulazione dello splicing alternativo: - Design di oligonucleotidi antisenso: Progettazione di oligonucleotidi antisenso specifici per modulare gli eventi di splicing alternativi di interesse. - Trasfezione di linfociti T: isolamento di linfociti T da pazienti con SM e controlli sani. Trasfezione di linfociti T con gli oligonucleotidi antisenso e valutazione dell'efficacia di modulazione dello splicing. - Valutazione della patogenicità: - Saggi immunoenzimatici (ELISA): Valutazione della reattività degli anticorpi contro i potenziali neoepitopi nei pazienti con SM. Titoli di Studio richiesti: Dottorato di ricerca in ambito di biologia cellulare, biologia molecolare e/o genetica Competenze tecniche: - Solida esperienza in tecniche di biologia molecolare e cellulare, tra cui isolamento di RNA, qPCR, Western blotting, trasfezione cellulare, sequenziamento Sanger, microscopia. - Ottima conoscenza delle metodiche di preparazione delle libraries per sequeziamento di RNA (RNA-seq bulk, e single cell sequencing). - Esperienza nella progettazione e utilizzo di oligonucleotidi antisenso. - Capacità di lavorare in modo indipendentee in team. - Ottime capacità comunicative sia scritte che orali, per presentare i risultati della ricerca. - Solida esperienza pluriennale nel ruolo di ricercatore/a in biologia molecolare e cellulare; - Comprovata capacità di progettazione e conduzione di esperimenti di biologia molecolare; - Conoscenza approfondita della lingua inglese. - Le persone interessate sono invitate a leggere l'informativa privacy ex artt. 13 e 14 del Reg. UE 2016/679._ Data pubblicazione avviso: 11 / 12 / 2024 Data di inserimento prevista: 31 / 12 / 2024